Diet Research Data (試験データ集)：雄 C57BL/6Jおよび KK-Ay マウスに対する High Fat Diet 32 給与の影響

 

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１.目的

超高脂肪固型飼料（High Fat Diet32;以下 HFD32）が、正常マウスおよび肥満・2型糖尿病モデルマウスに及ぼす影響について比較・検討しました。

 

２.材料および方法

（1）試験の実施場所

日本配合飼料（株）（現フィード・ワン（株））中央研究所のマウス飼育室（コンベンショナル）にて実施しました。

（2）給与飼料

• CE-2 ：粗脂肪含量 4.6%、Fat kcal% 11.9%、可溶性無窒素物含量 51.4%、NFE kcal% 59.3%
• High Fat Diet 32（以下 HFD32）：粗脂肪含量 32.0%、Fat kcal% 56.7%、可溶性無窒素物含量 29.4%、NFE kcal% 23.2%

（3）動物

肥満・2型糖尿病モデルマウスである KK-Ay/Ta Jcl、および C57BL/6JJclの 5週齢の雄を対象としました。また供試数は、1試験群あたり 6匹としました。

（4）飼育方法

• 温度と湿度：温度＝ 24～ 27℃、湿度＝ 50～ 70%
• 照明：12時間の明暗サイクル（点灯時間 9：00～ 21：00）
• ケージ：滅菌木製チップを入れたポリカーボネート製ケージに 1匹ずつ入れて飼育
• 飼料：自由摂取
• 飲水：水道水を自由摂取

（5）試験方法

4週齢のKK-Ay マウスおよびC57BL/6Jマウスを導入し、1週間の順化後、体重および空腹時血糖値を指標に各区間に差が生じないように 2群（CE-2群、HFD32群）に振り分けました。5週齢から 12週齢まで試験飼料の給与を実施し、一晩絶食後（15時間）解剖に供しました。また得られた血液サンプルは、血清中脂質関連物質（中性脂肪、遊離脂肪酸、総コレステロール）および血糖値、インスリン濃度の測定に供しました。尚、有意差検定は Student's t-testで実施しました。

 

３.結果

以下に記載しております。

 

1.体重

各系統における体重変化

図のポイントと縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は各週齢の試験群間で実施し、図中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

 

2.摂餌量・飲水量

各系統における摂餌量の推移

図のポイントと縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は各週齢の試験群間で実施し、図中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

各系統における飲水量の推移

図のポイントと縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は各週齢の試験群間で実施し、図中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

 

3.随時血糖値

各系統における随時血糖値の推移

採血は 2週間毎に尾静脈から採取し、採取の時間は点灯 4時間後の午後 1時としました。全血を簡易血糖測定器（グルテスト PROR ／（株）三和化学研究所）にて測定しました。図の縦棒と縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は各週齢の試験群間で実施し、図中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

 

4.経口糖負荷試験

8および 12週齢時の C57BL/6Jマウスにおける経口糖負荷試験結果 ̶ 1

8週齢および 12週齢時に実施しました。一晩絶食（20時間）後、グルコース溶液（2g/kg体重）を胃ゾンデで経口投与し、投与前（0分）、投与後 30、60、120分に尾静脈より採血し、得られた血液は血漿として冷凍保存（-40℃）しました。血糖値はグルコース CⅡ-テストワコー（和光純薬工業（株））にて測定しました。図のポイントと縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は各時間の試験群間で実施し、図中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

8および 12週齢時の C57BL/6Jマウスにおける経口糖負荷試験結果 ̶ 2

【血糖和および血糖上昇面積】

血糖和は経口糖負荷試験の各時間の血糖値の和を算出しました。血糖上昇面積は、以下の計算式により算出しました。

血糖上昇面積（mg/dl・h）＝｛（a ＋ 2b ＋ 3c ＋ 2d）×1/4｝-2a
（a,b,cおよび dはそれぞれ 0,30,60および 120分後の血糖値）

図の縦棒と縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は試験群間で実施し、図中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

8および 12週齢時の KK-Ay マウスにおける経口糖負荷試験結果 ̶ 1

8週齢および 12週齢時に実施しました。一晩絶食（20時間）後、グルコース溶液（2g/kg体重）を胃ゾンデで経口投与し、投与前（0分）、投与後 30、60、120分に尾静脈より採血し、得られた血液は血漿として冷凍保存（-40℃）しました。血糖値はグルコース CⅡ-テストワコー（和光純薬工業（株））にて測定しました。図のポイントと縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は各時間の試験群間で実施し、図中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

8および 12週齢時の KK-Ay マウスにおける経口糖負荷試験結果 ̶ 2

【血糖和および血糖上昇面積】

血糖和は経口糖負荷試験の各時間の血糖値の和を算出しました。血糖上昇面積は、以下の計算式により算出しました。

血糖上昇面積（mg/dl・h）＝｛（a ＋ 2b ＋ 3c ＋ 2d）×1/4｝-2a
（a,b,cおよび dはそれぞれ 0,30,60および 120分後の血糖値）

図の縦棒と縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は試験群間で実施し、図中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

5.インスリン負荷試験

8および 12週齢時の C57BL/6Jマウスにおけるインスリン負荷試験結果

インスリン溶液（0.75IU/kg体重）を腹腔内に投与し、投与前（0分）、投与後 20、40、60、80、120分に尾静脈より採血し、全血を用いて簡易血糖測定器（グルテストPROR／（株）三和化学研究所）で血糖値を測定しました。図のポイントと縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は各時間の試験群間で実施し、図中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

8および 12週齢時の KK-Ay マウスにおけるインスリン負荷試験結果

8週齢および 12週齢時に実施しました。インスリン溶液（0.75IU/kg体重）を腹腔内に投与し、投与前（0分）、投与後 20、40、60、80、120分に尾静脈より採血し、全血を用いて簡易血糖測定器（グルテストPROR／（株）三和化学研究所）で血糖値を測定しました。グラフのポイントと縦線は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は各時間の試験群間で実施し、グラフ中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

6.解剖時血液分析

解剖時の血清および血漿分析

表の値は平均値±標準誤差を表しています。12週齢時に解剖を実施し、その際に血液も採取しました。20時間絶食後エーテル麻酔下で開腹し、後大静脈から血液を採取し、血漿および血清として冷凍保存しました。総コレステロール、中性脂肪、遊離脂肪酸およびグルコースはそれぞれ臨床検査キット（コレステロールE-テストワコー、トリグリセライドE-テストワコー、NEFAテストワコー、グルコースCⅡ-テストワコー）にて測定しました。インスリンの測定には、インスリン測定キット（（株）森永生科学研究所）を用いました。統計処理は試験群間で実施し、表中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

 

7.解剖時主要臓器重量

臓器重量

表の値は平均値±標準誤差を表しています。統計処理は試験区間で実施し、表中の＊は有意差があることを示しています（ p＜ 0.05）。

解剖時（20週齢時）主要臓器および部位別脂肪組織重量